Даярдоо жана тоок эти Адреномедуллин (ADM) реагентине талаптар

1. Сыворотка: бөлмө температурасында 10-20 мүнөт коагуляция, 20 мин центрифугалоо 2000-3000 rpm ылдамдыкта. Үстүңкү затты кылдаттык менен чогултуңуз жана сактоо учурунда жаан пайда болсо, кайра центрифугалаңыз.

2. Плазма: EDTA же натрий цитраты антикоагулянт катары үлгүнүн талаптарына ылайык тандалышы керек. 10-20 мүнөт аралаштыргандан кийин 2000-3000 rpm ылдамдыкта 20 мүнөт центрифугалоо. Үстүңкү затты кылдаттык менен чогултуңуз жана сактоо учурунда жаан пайда болсо, кайра центрифугалаңыз.

3. Заара: стерилдүү түтүк менен чогултуу, 2000-3000 rpm ылдамдыкта 20 мүнөт центрифугалоо. Үстүңкү затты кылдаттык менен чогултуңуз жана сактоо учурунда жаан пайда болсо, кайра центрифугалаңыз. Көкүрөк жана курсак суюктугу, жүлүн суюктугу шилтемесин ишке ашыруу.

4. Клетка культурасынын супернатанты: экссудациялык компоненттерди аныктоодо стерилдүү түтүк менен чогултуу. 2000-3000 rpm ылдамдыкта 20 мүнөт центрифугалоо. Супернатантты кылдаттык менен чогултуңуз. Клеткадагы компоненттерди аныктоодо клетка суспензиясы PBS (рН 7,2-7,4) менен суюлтулган жана клетканын концентрациясы болжол менен 1 миллион/млге жеткен. Кайталап тоңдуруу жана эритүү аркылуу клеткалар жок кылынат жана клетка ичиндеги компоненттер чыгарылат. 2000-3000 rpm ылдамдыкта 20 мүнөт центрифугалоо. Супернатантты кылдаттык менен чогултуңуз. Консервациялоодо жаан пайда болсо, кайра центрифугалаңыз.

5. Ткань үлгүсү: Үлгү кесилгенден кийин, аны таразага тартыңыз. Белгилүү өлчөмдөгү PBS, PH7.4 кошуңуз. Кийинчерээк колдонуу үчүн суюк азотто тез криоконсервациялоо. Үлгү эригенден кийин 2-8 градус температурада калат. Белгилүү өлчөмдөгү PBS (PH7.4) кошулуп, үлгү толугу менен кол менен же гомогенизатор менен гомогенизацияланган. 2000-3000 rpm ылдамдыкта 20 мүнөт центрифугалоо. Супернатантты кылдаттык менен чогултуңуз. Бирин сынап көрүү үчүн бөлүп, калганын запас үчүн тоңдуруңуз.

6. Үлгүлөр чогултулгандан кийин мүмкүн болушунча тезирээк алынышы керек. Экстракция тиешелүү адабияттарга ылайык жүргүзүлүшү керек, ал эми экстракциядан кийин мүмкүн болушунча тезирээк эксперименттер жүргүзүлүшү керек. Эгерде сыноону дароо жүргүзүү мүмкүн болбосо, үлгүнү -20 градуста сактоого болот, бирок кайра-кайра тоңдуруу жана эрүүдөн качуу керек.

7. NaN3 камтыган үлгүнү аныктоо мүмкүн эмес, анткени NaN3 HRP активдүүлүгүнө бөгөт коёт.